Somatropin merupakan rekombinan hormon pertumbuhan yang digunakan untuk pengobatan gangguan pertumbuhan pada anak-anak dan defisiensi hormon pertumbuhan pada orang dewasa. Somatropin tentunya perlu diuji sebelum dirilis. Metode pengujian somatropin berfokus pada parameter fisika-kimia termasuk pengujian varian muatan (charge variants).
Apa metode yang tepat untuk melakukan pengujian somatropin?
Referensi
Wang, Fang. 2018. Quantitation of Somatropin Charge Variants Impurities by Capillary Zone Electrophoresis (CZE). SCIEX.
Pada industri biofarmasi, produk obat perlu dilakukan uji mutu sebelum produk tersebut dirilis ke pasaran. Pada beberapa tahun terakhir, capillary electrophoresis telah menjadi pilihan bagi industri biofarmasi untuk melakukan quality control suatu produk. Berbagai industri biofarmasi telah mengganti metode tradisional seperti slab gel dengan metode capillary electrophoresis seperti, capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate (CE-SDS), capillary isoelectric focusing (cIEF) and capillary zone electrophoresis (CZE).
Simak berbagai keunggulan dari CE-SDS, CIEF dan CZE dalam aplikasi biofarmasisi berikut ini.
CE-SDS untuk analisis protein terapeutik
CE-SDS hadir sebagai pengganti metode slab gel, SDS-PAGE. CE-SDS menawarkan keunggulan dari berbagai sisi bila dibandingkan dengan SDS-PAGE dalam analisis protein terapeutik, diantaranya;
Berikut ini adalah salah satu contoh elektroferogram CE-SDS hasil analisis monoklonal antibodi (tereduksi dan non-reduksi).
cIEF untuk analisis varian muatan
cIEF dapat menggantikan metode kromatografi pertukaran ion (IEC) dalam analisis varian muatan. cIEF mempunyai berbagai keunggulan dibandingkan metode IEC, diantaranya;
Pada cIEF, molekul akan dipisahkan berdasarkan pH isoeletrik molekul. Berikut ini contoh elektroferogram cIEF hasil analisis sampel MAb yang memperlihatkan efisiensi pemisahan yang baik dari cIEF
Gambar 2. Tiga grup isoform (grup basa, grup utama dan grup asam) dan tujuh puncak isoform (A – G) yang digunakan untuk analisis pemisahan mAb
CZE-LIF untuk analisis N-Linked Glycans Analysis
CZE merupakan instrumen yang tepat untuk melakukan identifikasi glikosilasi karena keunggulannya dalam hal waktu analisis (waktu analisis singkat) dan kemampuannya untuk memisahkan dan mengukur senyawa isomer.
Berikut ini contoh elektroferogram CZE hasil analisis N-Glycans pada mAb terapeutik rekombinan, menggunakan detektor LIF.
Gambar 3. Hasil pemisahan oligosakarida yang terikat pada MAb terapeutik rekombinan. Sejumlah spesi oligosakarida dapat dipisahkan satu sama lain (A)
Untuk mengetahui lebih dalam masing-masing pengujian tersebut, jurnal dapat diunduh melalui tombol download pada kiri atas laman.
Referensi:
Felten, Chantal and Oscar Salas Solano. Capillary Electrophoresis in Quality Control PART I: Application for Therapeutic Proteins. 2018.
Lucy Y. Liu, Chitra Ratnayake, Jeff Chapman, Narasaiah Dontha, Sae Choo, M. P. Reddy SCIEX Application Note A1973A, 2003
Mack S, Cruzado-Park I, Chapman J, Ratnayake C, Vigh G., Electrophoresis. 2009 Dec; 30 (23): 4049-58.
Rampal S, Salas O, Lies M. SCIEX Application Note A13376A, 2010.
Kertas Saring Whatman terbuat dari serat selulosa dengan persentase alfa selulosa yang tinggi sehingga memberikan kualitas dan konsistensi yang tinggi. Terdapat beberapa tipe kertas saring Whatman berdasarkan retensi partikel, ketebalan, dan berat serta memiliki sifat dan aplikasi yang beragam.
Whatman Qualitative Filter Paper
Kertas saring kualitatif biasa digunakan untuk analisa kimia kualitatif dan pemisahan filtrasi. Kertas saring kualitatif memiliki kadar abu sekitar 0,06%.
Berikut beberapa jenis kertas saring kualitatif dari Whatman :
Kertas saring bulat tersedia mulai diameter 10 mm hingga 500 mm dan tersedia juga dalam bentuk persegi seperti ukuran 580x580 mm
Whatman Quantitative Filter Paper
Kertas saring kuantitatif biasa digunakan untuk analisa kuantitatif seperti analisis gravimetri dengan proses pembakaran.
Perbedaan antara kertas saring kuantitatif dan kualitatif terutama terletak pada jumlah abu yang dihasilkan setelah proses ashing.
Terdapat 3 jenis kertas saring kuantitatif dari Whatman diantaranya:
Berikut beberapa jenis kertas saring kuantitatif ashless dari Whatman :
Whatman Quantitative Filter Paper
Kertas saring kuantitatif hardened low ash memiliki ketahanan kimia yang tinggi dengan ash content 0,015%.
Berikut beberapa jenis kertas saring kuantitatif hardened low ash dari Whatman :
Kertas saring kuantitatif hardened ashless grades memiliki ketahanan kimia yang tinggi dengan ash content yang rendah sebesar 0,005%.
Berikut beberapa jenis kertas saring kuantitatif hardened ashless grades dari Whatman :
*Untuk melihat dalam format pdf, klik tombol "download" pada kiri atas laman.
Erythropoietin (EPO) adalah hormon alami yang disekresi oleh ginjal untuk merangsang produksi sel darah merah pada sumsum tulang. EPO merupakan salah satu glikoprotein rekombinan terapeutik pertama yang dikomersialkan untuk pengobatan anemia. Karakterisasi EPO sangat penting dilakukan oleh produsen guna memastikan keefektifan dari EPO yang diproduksi. Kebanyakan industri biofarma menggunakan mode Capillary Zone Electrophoresis (CZE) untuk melakukan karakterisasi EPO dengan mengacu pada European Pharmacopeaia.
Apa itu CZE?
CZE merupakan mode capillary electrophoresis yang paling sederhana. Mekanisme pemisahannya berdasarkan perbedaan rasio charge-to-ratio.
Capillary Zone Electrophoresis
Setelah sampel diinjeksi, tegangan akan diaplikasikan dan menyebabkan komponen-komponen pada sampel terpisah menjadi zona-zona (lihat gambar) akibat adanya perbedaan muatan dan ukuran dari komponen-komponen tersebut.
Dengan mengacu pada European Pharmacopoeia, dilakukan analisis EPO mengggunakan PA 800 Plus.
SCIEX PA 800 Plus
Berdasarkan hasil elektroferogram Biological Reference Preparation (BRP) EPO menggunakan PA 800 Plus, delapan isoform EPO dapat terpisah dengan baik dan sesuai dengan karateristik eletrofegram EPO yang dipaparkan oleh European Pharmacopeia.
Hasil elektroferogram EPO BRP menggunakan PA 800 Plus
Capillary Electrophoresis dapat diterapkan untuk karakterisasi EPO karena kemampuannya memisahkan isoform dengan resolusi tinggi dari campuran glikoprotein yang kompleks.
Referensi
Eroupean Pharmacopoeia 10.0 (2019)
Santos, Marcia R. 2014. Applying the European Pharmacopoeia Capillary Zone Electrophoresis Method for the Separation of Recombinant Human Erythropoietin (EPO) Using the ProteomeLab PA 800 Protein Characterization System
Santos, Marcia R. 2016. Separation of Recombinant Human Erythropoietin (rhEPO) using the European Pharmacopoeia Method on the PA 800 plus Pharmaceutical Analysis System
